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O primeiro contrato tinha como meta entregar uma prova de conceito (TRL3), que nós estipulamos como a modificação genética de células do mexilhão. Foi uma etapa intensa em pesquisa e pela escala de desenvolvimento da ANEEL, classificada com ‘pesquisa aplicada’. Isso porque existem muitas lacunas de conhecimento na bioquímica, fisiologia molecular e biologia celular do mexilhão dourado.
O trabalho começou com a busca de genes candidatos para alvo da modificação genética. Deveriam ser genes que impedissem a reprodução do mexilhão. Mas as informações sobre genes de reprodução em bivalves eram tão incipientes que tivemos que buscar análogos (ou, mais corretamente, ortólogos) em outras espécies. Ao final, chegamos a uma lista de 26 genes alvo. Mas essa lista está se modificando conforme nosso entendimento da reprodução do mexilhão aumenta.
Também precisávamos testar se as ferramentas de edição gênica existentes funcionariam no mexilhão. Uma etapa trabalhosa de tentativa e erro da qual não temos como escapar. O maior desafio acabou sendo a obtenção das células germinativas para realizar os experimentos de modificação. Mas conseguimos modificar geneticamente espermatozóides para expressar o gene da proteína fluorescente verde (GFP) e de quebra contribuir para a compreensão que existe transcrição nesse tipo celular (uma questão coberta de controvérsia na literatura).
Nessa etapa ainda analisamos mexilhões de 5 reservatórios, do sul ao nordeste do país, pela técnica da ddRAD, com mais de 8000 loci monitorados, para concluir que não há diferentes populações no Brasil e, portanto, todos os mexilhões poder ser impactados pela modificação genética que está sendo desenvolvida.
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